ESC/HR-based Gene Editing

百奥赛图在CRISPR/Cas9技术基础上开发和优化出一套更加高效的EGETMExtreme Genome Editing)基因编辑系统。与基础的CRISPR / Cas9相比, EGETM介导的同源重组效率提高了近20倍,使我们的模型制备开发过程更加快速且有效。

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    基于胚胎干细胞技术基因编辑流程

    基于胚胎干细胞的基因编辑是利用干细胞的全能性进行基因编辑小鼠制备。首先将打靶载体电转进小鼠胚胎干细胞。筛选成功重组的细胞克隆,注射到正常小鼠囊胚中。注射后,干细胞在囊胚中扩增分化,形成嵌合胚胎。然后将囊胚移植到代孕小鼠中。最终,将嵌合小鼠与野生小鼠品系进行繁育,获得含有可遗传目的基因的模式动物。

    百奥赛图基于ESC技术的基因编辑优势

    尽管传统的基因编辑方法也能够完成基因编辑,但基于ESC/HR的基因编辑提供了以下优势:

    服务工作流程
    敲除小鼠模型

    在基于ESC技术的基因敲除小鼠中,我们使用正筛选标记来替换目的基因的外显子,目的基因被全身性敲除,而在条件性敲除动物中,该基因仅在选定的细胞中被敲除,这由组织特异性启动子决定。通常使用Cre-LoxP或Flp-Frt重组酶系统制备条件基因敲除小鼠模型。

    敲入小鼠模型

    将目的DNA片段插入基因组中的特定位置来制备基因敲入小鼠。利用这种方式也可以制备包括点突变,报告基因敲入,标签敲入,Cre工具鼠和人源化小鼠等。

    胚胎干细胞(ES细胞)与CRISPR/Cas9基因靶向的优势是什么?

    基于ES细胞的靶向技术能够实现复杂基因组的修饰,并支持在小鼠基因组中实现大于6kb的片段敲入。