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百奥赛图提供了全面的体外细胞功能评价服务。利用原代细胞和细胞系，通过流式细胞术、ELISA、HTRF、Incucyte细胞成像等实验技术，对候选抗体的结合能力，Fc相关功能特性，Fab相关功能特性等体外药理学进行检测评价，为阐释候选抗体药效作用、毒性作用机制以及临床转化研究提供支持。
体外药理学服务包括以下实验：
1. 一般实验
2. Fab 相关功能实验
非免疫细胞
细胞因子
3. 基于免疫细胞的实验
流式细胞术：
IncuCyte：
细胞因子分析：
Fc相关功能实验
Fab相关功能实验
本实验以PBMCs作为效应细胞。以高浓度CFSE标记的Jurkat-h4-1BB细胞为靶细胞，以低浓度CFSE标记的Jurkat WT细胞为对照细胞。这些细胞在不同浓度的抗人4-1BB抗体存在下孵育18小时。
细胞毒性百分比=[1 - (对照孔比率 / 实验孔比率)] × 100；比率=CFSElow细胞数/CFSEhigh细胞数。
使用Far Red染料标记巨噬细胞（E），使用CFSE染料标记Raji细胞（T）。E:T = 1:5。添加不同浓度的CD20 IgG1抗体并孵育4小时，通过流式细胞术检测巨噬细胞的吞噬作用。
吞噬指数（PI）=（吞噬的巨噬细胞数量）/（巨噬细胞总数）× 100%
CD20 IgG1抗体介导的CDC实验。在含有补体的情况下，将Raji细胞与不同浓度的CD20 IgG1抗体混合，并孵育2小时。通过LDH法检测抗体的细胞毒性效应。
Cytotoxicity % = （实验孔LDH值 − 自发释放孔LDH值）/（靶细胞最大LDH释放值 − 自发释放孔LDH值）× 100%
将人CD4+ T细胞与异体树突状细胞以10:1比例在96孔圆底培养板中混合，添加不同浓度的nivolumab（in house），并在120小时孵育后通过ELISA测定释放的IFN-γ含量。结果显示，nivolumab（in house）在混合淋巴细胞反应（MLR）中剂量依赖性地增强了IFN-γ和IL-2的产生。
将人PBMC与SEB（10 ng/mL）共同孵育，随后添加不同浓度的ipilimumab或同型对照抗体，再进一步孵育48小时。通过ELISA检测IL-2的释放。结果显示，ipilimumab剂量依赖性地增强了SEB刺激的PBMC产生IL-2。
PBMC或CD3+ T细胞与Daudi细胞共同培养，添加不同浓度的CD3×CD19双特异性抗体（BiTE）。
48小时后，检测CD4+和CD8+ T细胞的激活情况。随着抗体浓度的增加，激活的T细胞（CD25+）显著增加。
Daudi细胞与CFSE标记的CD3+ T细胞共同孵育，处理不同浓度的Blinatumomab，该抗体作用于CD3和CD20。在3天后通过流式细胞术评估T细胞增殖，结果显示在Daudi细胞存在的情况下，随着Blinatumomab剂量的增加，T细胞增殖显著增加。
用Far Red标记的Daudi细胞与CD3+ T细胞共同孵育，处理不同浓度的Blinatumomab。24小时/48小时后通过流式细胞术评估细胞毒性。随着抗体浓度的增加，细胞毒性显著增强。
通过流式细胞术检测5种细胞系的Her2表达
NCI-N87细胞分别用不同浓度的曲妥珠单抗、Enthertu或Disitamab Vedotin (RC48)处理，细胞融合度通过Incucyte连续监测，图示为处理6天后的细胞融合情况。Enthertu或RC48均可以剂量浓度依赖方式显著抑制NCI-N87的增殖，而曲妥珠单抗则未显示明显的抑制有用。
NCI-N87、MCF-7和BT-474细胞分别与FabFluor标记的Disitamab Vedotin(RC48)或曲妥珠单抗孵育24小时，并通过Incucyte进行连续观察。照片中的橙色信号表示已内吞的抗体。Disitamab Vedotin(RC48)和曲妥珠单抗均在时间依赖性方式内吞进入NCI-N87（高HER2表达）和BT-474（高HER2表达）细胞，但未在MCF-7（无HER2表达）细胞中内吞。
与ISO-ADC相比，Her2-ADC能够在NCI-N87上引发细胞周期停滞，伴随着G2期细胞比例的急剧增加。
MDA-MB-468细胞（Her2-）和BT474（Her2+）细胞按不同的比例（分别为0:1、1:0、1:1）共培养过夜。经过RC48或空白对照处理5天后，通过流式细胞仪确定细胞数目和HER2阳性与HER2阴性细胞的比例。RC48对BT474细胞表现出很强的肿瘤杀伤效应，而对MDA-MB-468细胞几乎没有细胞毒性。重要的是，当MDA-MB-468细胞与BT474细胞共同培养时，RC48也能杀死MDA-MB-468细胞。
NCI-N87（Her2+）和HS-746T（Her2-）细胞分别与ISO-MMAE和Enthertu处理72小时。使用Annexin V/PI试剂盒通过流式细胞术检测细胞凋亡。在Her2高表达的NCI-N87细胞中，Enthertu能够显著诱导凋亡。
CD19-CAR T细胞或未转染T细胞分别与靶细胞（Daudi、Raji、K562）以5:1、10:1、20:1的比例共同培养24小时。通过流式细胞术使用Fixable Viability Dye评估肿瘤细胞毒性。
结果显示，与未转染的T细胞相比，CD19-CAR T细胞对表达CD19的Daudi和Raji细胞展现了显著的细胞毒性。然而，CD19-CAR T细胞对K562细胞（CD19阴性）没有显示出特异性的细胞毒性。
CD19-CAR T细胞用CFSE标记，与靶细胞（Raji、K562）以5:1、10:1、20:1的不同比例共同培养72小时。评估CD19-CAR T细胞的增殖、激活和细胞因子释放。
结果显示，与K562细胞（CD19阴性）相比，CD19-CAR T细胞与Raji细胞（CD19阳性）共同培养时，显著增殖、激活和释放细胞因子。
FACS
Cytokine
空气干燥的TGN 1412可在体外诱导PBMC的炎症因子风暴。
从人PBMCs中分离CD14+单核细胞，并用磁珠培养6天，随后与不同的细胞因子共培养。根据诱导条件，生成具有不同形态和表面标志物的巨噬细胞。
MDA-MB-231细胞作为靶细胞，在37°C下与不同浓度的CD73抗体孵育30分钟；加入AMP并孵育3小时；然后加入ATP和荧光底物检测荧光值。
随着CD73抗体浓度的增加，CD73酶活性被抑制，荧光值逐渐降低。
Incucyte系统可实时监测细胞趋化迁移过程。研究显示，CXCR4表达的Jurkat细胞对CXCL12的迁移可被CXCR4抗体显著抑制。
