CRISPR/EGE-based Gene Editing

百奥赛图在CRISPR/Cas9技术基础上开发和优化出一套更加高效的EGETMExtreme Genome Editing)基因编辑系统。与基础的CRISPR / Cas9相比, EGETM介导的同源重组效率提高了近20倍,使我们的模型制备开发过程更加快速且有效。

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    介绍
    使用EGE™技术的CRISPR服务

    CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种细菌降解入侵病毒DNA和其他外源DNA的防御机制。来源于化脓链球菌的CRISPR / Cas9系统是目前最常用的一种。

    CRISPR/Cas9系统的生化机制是什么?

    Cas9蛋白首先与CRISPR RNA(crRNA)和TRACER RNA(tracrRNA)结合,形成复合物,随后结合到目标序列上,形成RNA-DNA复合物。该复合物最终在DNA中产生双链断裂。crRNA识别目标DNA序列,tracrRNA是Cas9活性的保守必要组分。

    为了简化实验室中基因编辑的程序,将crRNA和tracrRNA融合在一起,形成单链向导RNA(sgRNA)。可以通过转染表达sgRNA和Cas9蛋白的质粒来编辑目标基因。CRISPR / Cas9技术已成功用于细菌,酵母,植物,鱼类和哺乳动物,是迄今最有效的基因编辑技术。

    为什么选择CRISPR/EGE™平台?(CRISPR/EGE™与标准CRISPR/Cas9的比较)

    最近,基因编辑服务的重点已经转向基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术,因为它由于其效率和多功能性,正在成为大多数商业基因靶向服务的金标准。您可能已经听说,使用标准的CRISPR/Cas9服务技术时,外源DNA与目标基因组之间的同源重组效率通常较低。这确实是事实。然而:

    百奥赛图已经开发了创新的EGE™系统,基于CRISPR/Cas9基因靶向平台。通过其位点特异性的基因编辑,EGE™比单独使用CRISPR/Cas9在插入大型DNA片段方面效率提高了近20倍,非常适合用于构建各种类型的基因修饰小鼠/大鼠和细胞模型。因此,EGE™缩短了构建基因编辑动物模型的时间,并且百奥赛图的基因编辑服务项目成功率高达98%。

    使用EGE™可以创建的基因修饰模型包括但不限于:常规的基因敲除/敲入、条件性敲除/敲入、安全位点敲入、人源化等。

    我应该选择CRISPR/EGE™还是ESC/HR?

    在百奥赛图,85%的小鼠和100%的大鼠基因编辑项目都是通过EGE™技术生成的。尽管EGE™技术相对更便宜,且能够比ESC技术提供更短的项目周期,但在敲入片段大于18kb的项目中,仍需要使用ESC/HR技术。

    百奥赛图 CRISPR/Cas9基于EGE™技术的优势:
    High Speed The F0 generation positive mouse can be obtained in two months at the earliest, while the F1 generation can be obtained in five months
    Zero Risk Supported by a strong production platform, customers will be fully refunded if the project fails
    High Efficiency Compared with standard CRISPR/Cas9 technology, the efficiency of homologous recombination mediated by the EGE™ system is increased by 10-20 fold
    High Quality Southern blot screening minimizes follow-up experimental risks caused by random insertions
    Diversification Conventional knockout, conditional knockout, and gene knockin, etc.
    No Species Limitation Cell line, mouse, rat, pig, monkey, and zebra fish, etc.
    百奥赛图CRISPR/Cas9基于EGE系统服务流程:
    所有项目始终执行严格的质量控制(QC)

    在百奥赛图,我们非常重视质量控制(QC),因我们的专家深知QC是决定项目成败的关键分水岭。了解更多关于我们严格质量控制的信息。

    Southern blot排除随机插入

    对大量数据统计分析发现,基于CRISPR/Cas9技术的基因编辑课题中,随机插入概率约为32%(来自打靶载体)。而在这32%中,有14%的随机插入无法依靠交配传代去除。排除随机插入的金标准是Southern blot检测。百奥赛图坚持进行Southern检测,以确保基因编辑获得的动物不存在随机插入。