神经系统科学

多发性硬化（EAE）模型

百奥赛图已建立MOG诱导的EAE疾病模型，可用于MS相关药物的药效评估。

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  • 实验结果

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    多发性硬化症（EAE）小鼠模型介绍

    多发性硬化症(Multiple sclerosis, MS)是一种中枢神经系统慢性炎症性疾病，可导致脑炎和脱髓鞘发生。MS被认为是一种自身免疫性疾病，由自身反应性T细胞引起，症状包括肌肉僵硬和麻痹、视觉障碍和失明、感觉丧失和共济失调，具有反复复发的特征。目前有多种不同的MS动物模型，其中实验性自身免疫脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)模型由于具有和MS相似的炎症和脱髓鞘的病理特征，被广泛应用于多发性硬化症的研究。

    在小鼠、大鼠等啮齿类动物中，可使用脊髓匀浆、纯化的髓鞘、髓鞘蛋白（如髓磷脂碱性蛋白MBP、蛋白脂蛋白PLP和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG）或这些蛋白的肽免疫诱导产生EAE模型。这可能是由于髓磷脂特异性T细胞在外周被激活，穿过血脑屏障进入中枢神经系统并被重新激活，引发一系列炎症反应，导致脱髓鞘和轴突细胞凋亡，最终导致神经损伤和失去功能。使用标准化评分系统评估临床症状，可衡量疾病的诱导发生程度，在病理组织染色切片中可见局部脱髓鞘和炎性白细胞浸润。

    百奥赛图已建立MOG诱导的EAE疾病模型，可用于MS相关药物的药效评估。

    实验结果
    MOG35-55诱导EAE的方案

    造模方法： 动物在第0天接收MOG35-55/CFA乳剂（皮下注射）在侧腹部（蓝点）或颈部和臀部（红点），并在MOG35-55/CFA乳剂注射后2小时和24小时分别注射PTX（腹腔注射）。记录体重和EAE评分，每2天记录一次。在实验结束时收集脊髓的腰部扩大部分，进行H&E和LFB染色。

    实验动物： C57BL/6，B-hCD40hFcRn小鼠，8-10周，雌性
    检测指标： 体重和临床评分（每两天）H&E，Luxol Fast Blue（LFB）染色

    Readout
    Included tests Phenotype Body weight
    Clinical score
    Histopathology H&E; LFB
    Optional tests Tissue homogenate Cytokines analysis
    Peripheral blood flow cytometry Flow cytometry assay
    Score Symptoms Description
    0 Normal Hold mouse by the base of the tail. Unaffected, mouse can "helicopter" tail.
    0.5 Tail limpness Hold mouse by the base of the tail. Some loss of tail tone.
    1 Hold mouse by the base of the tail. Complete tail limpness, with no evidence of limb weakness.
    1.5 Limpness No hind limb paralysis, but the hind limbs fail when ambulating on the lid metal grid.
    2 Gait irregularities. Hold mouse by the base of the tail, the hind limbs are curled up.
    Or mouse's head is tilted, it can't keep balance with no hind limb paralysis.
    2.5 Hind limbs paralysis Partial paralysis of hind limbs, waddles upon ambulation, but does not drag limbs.
    Or mouse's head is tilted, and it keep fall down with no hind limb paralysis.
    3 Partial paralysis of hind limbs as evidenced by dragging one limb upon ambulation.
    3.5 Forelimbs paralysis Complete paralysis of both hind limbs, dragging body by forearms, still capable of moving around the cage.
    4 Responsive but not moving/stationary, listless, rapid breathing (consult institutional veterinarian, consider euthanasia).
    4.5 Dead Immobile and unresponsive, moribund (immediate euthanasia recommended).
    5 -
    MOG35-55诱导的C57BL/6小鼠EAE模型
    Group Onset (day) Peak (day) Incidence
    G1:
    C57BL/6J    		 12 16 5/5
    12 16
    14 17
    12 16
    12 16
    G2:
    C57BL/6N    		 14 18 5/5
    12 14
    14 18
    14 16
    14 18

    图1. MOG35-55诱导的EAE模型。 C57BL/6J和C57BL/6N（A，B）小鼠在第0天接受MOG35-55乳剂注射（皮下注射）在颈部和臀部（C）。MOG注射后2小时和24小时给予PTX（腹腔注射）。每2天记录一次体重和临床评分。数据以均值±标准误（SEM）表示，n=5。

    抗人CD40抗体在B-hCD40/hFcRn小鼠EAE模型中的药效评估

    抗CD40抗体对MOG35-55诱导EAE模型的药效评估。 小鼠在第0天接收MOG35-55乳剂注射（皮下注射）在侧腹部（蓝点）。MOG注射后2小时和48小时给予PTX（腹腔注射）。在第0、4和8天给予同种型对照或抗CD40抗体。 (A) 体重 (B) 和临床评分 (C) 每两天记录一次。通过H&E和LFB染色评估脊髓的免疫细胞浸润和脱髓鞘（D）。数据以均值±SEM表示，n=5，与G2比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

    CD40L抗体缓解B-hCD40/CD40L小鼠中MOG35-55诱导的EAE模型症状

    抗CD40L抗体对MOG35-55诱导EAE模型的药效评估。 小鼠在第0天接收MOG35-55乳剂注射（皮下注射）在颈部和臀部（红点）。MOG注射后2小时和48小时给予PTX（腹腔注射）。同种型对照组（G3）或抗CD40L抗体组（G4）每两周给予一次。记录体重（A）和临床评分（B），每两天记录一次。数据以均值±SEM表示，与G2比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。

    B-hCD40/CD40L小鼠EAE模型中的LFB和H&E染色

    抗CD40L抗体（类似物，内部制备）可改善EAE临床症状，并控制炎症和脱髓鞘。
    在第30天从B-hCD40/hCD40L小鼠取出脊髓并分别用Luxol Fast Blue（LFB）（A）或Hematoxylin和Eosin（H&E）（B）进行染色。显示了代表性切片。脊髓的炎症细胞和脱髓鞘评分（C&D）。数据以均值±SEM表示，与G2比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

    MOG35-55诱导的B-hCD40/CD40L小鼠EAE模型中的细胞因子分析

    抗CD40L抗体对MOG35-55诱导EAE模型的药效评估。小鼠在第0天接收MOG35-55乳剂注射（皮下注射）在颈部和臀部（红点）。MOG注射后2小时和48小时给予PTX（腹腔注射）。同型对照组或抗CD40L抗体组每两周给予一次。实验终点收集血清并评估细胞因子水平。数据以均值±SEM表示，n=6，与G2比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。